Скрининговая диагностика вич. Современные методы диагностики вич-инфекции. Проведение иммунного блоттинга

Диагностика ВИЧ инфекции необходима для назначения эффективного лечения. Чтобы диагностировать СПИД, проводится стандартная процедура обследования пациента. Она состоит из 2 этапов:

сдача скрининга;
иммунный блоттинг.

Для постановки диагноза дополнительно назначают ПЦР, экспресс-тестирование.

Проведение ИФА

Начальная диагностика СПИДа основана на применении лабораторных белков ВИЧ, которые улавливают специфические антитела. После их контакта с ферментами тест-системы изменяется цвет индикатора. Затем измененная цветовая гамма обрабатывается с помощью специальной аппаратуры, которая определяет результат тестирования.

Подобная лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции показывает результат через 21 день после инфицирования. С помощью ИФА нельзя определить наличие вируса. Данный метод диагностики способствует выявлению выработки антител к вирусу. Подобный процесс может наблюдаться через 2-6 недель после заражения.

Специалисты различают 4 поколения ИФА-систем с разной чувствительностью. Медики чаще применяют тесты 3 и 4 поколения. Эти системы созданы на основе рекомбинантных белков либо пептидов синтетического происхождения, которые обладают значительной точностью и специфичностью. ИФА применяется для выявления, мониторинга распространения вируса, что обеспечивает безопасность при проверке донорской крови. Точность таких систем колеблется в пределах 93-99%. Большей чувствительностью обладают тесты, выпущенные в Западной Европе. Чтобы выполнить диагностику, лаборант производит забор венозной крови (5 мл). За 8 часов перед исследованием рекомендуется отказаться от принятия пищи. Исследование чаще проводится утром.

Расшифровка данных

Для получения результатов теста потребуется 10 дней. Если результат отрицательный, то пациент не инфицирован. В таком случае лечение не назначается. Ложноотрицательный результат выявляется:

до 3 недель после инфицирования;
на последней стадии СПИДа при низкой иммунной системе;
при неправильной подготовке крови.

Если результат положительный, тогда пациент инфицирован. В таком случае проводят ИБ. Ложноположительный результат указывает на наличие сопутствующих заболеваний и неправильно проведенную подготовку крови. Если тестирование показано беременным, то в собранном материале врач может выявить неспецифические антитела, выработка которых не связана с вирусом. Собранный материал исследуется в референсе либо арбитражной лаборатории. Если результат повторного тестирования отрицательный, тогда первый результат – ошибочный. В таком случае ИБ не проводится.

Проведение иммунного блоттинга

Лечение СПИДа назначается при получении положительного результата иммунного блоттинга. Этот метод диагностики проводится с помощью нитроцеллюлозной полоски, на которую наносятся вирусные белки. Для ИБ используют венозную кровь, которая затем подвергается обработке. Белки, находящиеся в сыворотке, разделяются на группы с учетом их заряда и молекулярной массы. Для проведения такого процесса используется специальная аппаратура.

При наличии в исследуемом материале антител к вирусу, на полоске проявляются соответствующие линии. Положительное ИБ указывает на ВИЧ-инфицирование пациента. Сомнительный результат выявляется на начальных этапах заражения, при туберкулезе и онкологии, у беременных. В таких случаях рекомендуется повторное проведение ИБ.

Неопределенный результат ИБ указывает на наличие в иммуноблоте одного и более белков к вирусу. Подобная картина наблюдается при недавнем заражении, когда в крови находится незначительное количество антител к инфекции. В таком случае ИБ будет положительным через некоторое время. Неопределенный результат данного исследования может быть связан с отсутствием ВИЧ-инфекции при гепатитах, хронических обменных заболеваниях, в период беременности. В таком случае ИБ станет отрицательным или специалисты выявят у пациента причину неопределенного результата.

ПЦР исследование

Защитная система поражается на фоне внедрения вируса в человеческий организм. Для инкубационного периода характерен срок в 3 месяца. Поэтому после полового контакта с ВИЧ-инфицированным партнером рекомендуется пройти ПЦР-диагностику. Она позволит определить РНК вируса. Период, в течение которого рекомендуется пройти подобное исследование, составляет 8-24 месяца.

Для окончательного диагноза показана регулярная сдача крови на ВИЧ (1 раз в 3 месяца). За счет высокой чувствительности данное обследование позволяет выявить вирус через 10 дней после инфицирования. Ложноположительный результат при ПЦР можно получить и при наличии в организме пациента другой инфекции. ПЦР исследование считается дорогостоящей процедурой, так как требует наличия специального оборудования.

ПЦР назначается для выявления вируса у следующих лиц:

новорожденный, родившийся от ВИЧ-инфицированного матери;
пациенты с сомнительным ИБ.

Также данная методика показана для контроля концентрации вируса в крови и исследования донорской крови.

Быстрые методики исследования

К современным методам диагностики СПИДа специалисты относят экспресс-тесты. Для их расшифровки потребуется 10-15 мин. Иммунохроматографические тесты, основанные на капиллярном потоке, обеспечивают точные результаты. Такие системы тестирования представлены в виде специальных полосок, на которые наносится кровь либо слюна. При наличии вируса через 10 мин на тесте появляются 2 полоски:

контрольная;
цветная.

В данном случае результат тестирования носит положительный характер. На отрицательный результат указывает появление одной контрольной полоски. Для подтверждения полученного результата проводится ИБ. На основе общий данных врач ставит диагноз, назначает лечение.

Можно выявить вирус в домашних условиях. Для этого используют специальные экспресс-наборы. OraSure Technologies1 – система, разработанная в США. Если после тестирования выявлен положительный результат, пациенту рекомендуется пройти полное обследование в медицинском центре.

Обследование ребенка

Новорожденные детки, которые родились от инфицированных матерей, срочно подвергаются обследованию. С помощью серологических методик нельзя точно выявить вирус у деток в возрасте 5-18 месяцев. Но результат такого обследования важен при проведении ИБ.

Выявить инфицирование у деток можно с помощью ПЦР. ДНК вируса выявляет специалист у детей первого месяца жизни. Чтобы установить концентрацию РНК возбудителя, специалисты определяют провирус иммунодефицита. Для исследования врач использует цельную кровь либо ее высохшее пятно. Материал помещается в пробирку с консервантом ЭДТА (пропорция 1:20). Образец необходимо хранить при температуре не выше 8°С (на протяжении 2 суток). Не допускается замораживание материала.

Для получения образца сухой крови наносят цельную жидкость на специальную бумагу. Образец можно хранить при температуре ниже 8°С. Карточки используют в течение 8 месяцев. Новорожденного ребенка необходимо осмотреть, взяв материал на исследование, в течение следующих сроков:

через 48 часов после рождения;
в возрасте 2 месяцев после рождения;
через 3-6 месяцев после рождения.

Если врач выявил ген провируса ВИЧ через несколько часов после появления младенца на свет, то произошло внутриутробное инфицирование малыша. Заразиться вирусом можно и во время родов либо при грудном вскармливании. Результаты, которые указывают на наличие ДНК вируса в 2 образцах, указывают на развитие СПИДа у ребенка. Диспансерное наблюдение не требуется, если результаты ПЦР отрицательные через 4 месяца после рождения малыша.

Если результат тестирования отрицательный, но симптоматика СПИДа присутствует, тогда рекомендуется проконсультироваться с врачом. Подобная клиника может быть спровоцирована другими заболеваниями. Единственным и 100%-ным методом диагностики вируса считается тестирование. Даже квалифицированные и опытные специалисты не могут определить вирус по проявляемой симптоматике.

Если через некоторое время результаты пациента отрицательные, то ВИЧ в организме отсутствует.

При этом не учитывается симптоматика. Но подобная клиническая картина может быть связана со СПИДофобией. В таком случае требуется помощь психолога. При необходимости ребенку или взрослому назначают соответствующее лечение.

Скрининг - выявление частоты нераспознанной заболеваемости с помощью быстродействующих тестон. Как правило скрининг предполагает плановое тестирование ц рамках всей популяции или отдельных групп внутри популяции. Серологический тест на наличие у человека антител к ВИЧ стал широко доступен с 1985 г. В массовой практике тестирования и скрининга чаше всего используются методы иммуноферментного анализа, которые, однако, могут давать как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты.

Эти тесты были разработаны с целью исследования донорской крови и потому имеют настолько высокую чувствительность, что вероятная ошибка при их проведении дает положительный, а не отрицательный результат. В случае положительного результата тестирования донорская кровь обязательно подлежит уничтожению. Что же касается самого донора, то ему проводится контрольное тестирование. Ложноотрицательные результаты тестирования прежде всего зависят от того, что инкубационный период для ВИЧ-инфекции составляет 1-3 месяца (в среднем - 6 недель). В течение этого периода человек уже является вирусоносителем (и потому заразен), чего, однако, тест на антитела к ВИЧ не выявляет. Иногда такой "невидимый период" (или, как его еще называют, "скрытый период циркуляции вируса") может достигать трех лет.

Очевидно, что скрининг на ВИЧ всего населения будет неэффективен. В особенности там, где распространенность ВИЧ-инфекции незначительна, обследование даст больше ложноположительных. чем подлинно положительных результатов. Необходимо также учитывать сильнейшие стрессы для мнимых серопозитивов, которые подчас приводят к ятропсихогениям (своеобразным неврозам), нарастанию в обществе настроений "спидофобии", конфликтности общения, наконец - неразумным тратам финансовых ресурсов (одно тестирование обходится примерно в один доллар).

Возможность пройти тест на наличие антител к ВИ должна предоставляться каждому. В современном обществе тестирование может быть добровольным и обязательным. При доб ровольном анонимном тестировании пациент регистрируется под номером; при этом допустимо указание демографической информации (возраст, пол), но в документы не заносятся ни фамилия, ни адрес обследуемого. При добровольном конфиден циальном тестировании сведения о личности пациента отражаются в его медицинских документах, однако пациенту должны быть предоставлены гарантии неразглашения информации.

Тестирование на ВИЧ непременно должно сопровождаться консультированием пациента как до, так и после проведения тестирования. Адекватное информирование пациента подчас становится лучшей психотерапией. В зависимости от индивидуальных психологических характеристик каждого пациента его целесообразно проинформировать о том, что в медицинской литературе неоднократно сообщалось о случаях, когда регулярная половая жизнь с ВИЧ-инфицированным партнером в течение многих лет не приводила к заражению; что такое лож-ноположительные результаты тестирования; что положительный результат еще не означает заболевания СПИДом; что медицине известны случаи, когда СПИД не развивается у "ВИЧ-позитивов" более 10 лет, и т.д.

Грубейшим нарушением профессиональной этики будет не предваряемое компетентным консультированием сообщение пациенту о положительном результате тестирования, еще не подтвержденном в повторном анализе. Пациенты окончательно информируются о результатах тестирования только после подтверждения положительных результатов тестирования. Это делается для того, чтобы избежать трагических случаев, подобных тому, который произошел в Риге в 1991 г.: супруги, узнав о положительном результате тестирования у одного из них, покончили жизнь самоубийством; посмертные исследования факта заражения ВИЧ не обнаружили.

Проблема обязательного тестирования и скрининга на ВИЧ вызывает бурные споры, в которых переплетены научно-эпидемиологические, морально-этические, правовые, социально-экономические и даже политические аспекты. Во многих странах принят обязательный скрининг на ВИЧ крови, спермы, Других донорских тканей и органов. В США с 1985 г. введено обязательное тестирование в армии (ежегодно обязательному обследованию на ВИЧ подлежат 2 млн. рекрутов, военнослужащих и резервистов). В некоторых штатах проверка на СПИД обязательна перед вступлением в брак, а с 1997 г. к обязательной проверке на ВИЧ всех новорожденных приступили в штате Нью-Йорк.В целом и США существует множество законоположений об обязательном тестировании на ВИЧ, что отличает эту страну от остальных.

В Японии Министерство труда только в 1994 г. рекомендовало работодателям отказаться от требования обязательного тестирования при приеме на работу. Тем не менее, обязательное тестирование должны проходить работники, направляемые компаниями на работу в страны, законодательство которых требует от иностранцев наличия сертификата об отсутствии ВИЧ-инфекции и СПИДа. В этих случаях наличие положительного результата тестирования означает, что такой работник не будет послан за рубеж, однако руководство кампании обязано гарантировать ему сохранение рабочего места внутри страны.

В целом многие зарубежные специалисты считают, что практика обязательного тестирования на ВИЧ не только нарушает права человека, но также оказывается малоэффективной как заслон на пути распространения эпидемии, а потому ее использование должно быть достаточно ограниченным. ВОЗ также не поддерживает практику обязательного тестирования.

В нашей стране обязательная регистрация заболеваний СПИДом была введена в 19Н5 г.. с момента выявления первого случая заболевания (первой же страной, принявшей в 1983 г. закон об обязательном уведомлении обо всех случаях этой болезни, была Швеция). На начальном этапе политика борьбы со СПИДом в СССР почти целиком сводилась к обязательному скринингу. Так, в принятом в 1987 г. Указе Президиума Верховного Совета СССР "О мерах профилактики заражения вирусом СПИД" говорилось о том, что как граждане СССР, так и находящиеся на его территории иностранцы могут быть в обязательном порядке привлечены к медицинскому освидетельствованию на предмет заражения вирусом СПИД. Согласно Указу, заведомое поставление другого лица в опасность заражения СПИДом каралось лишением свободы на срок ло 5 лет, а самозаражение - на срок до & лет.

В изданных Минздравом СССР на основе этого Указа ""Правилах медицинского освидетельствования на выявление заражения вирусом СПИД" говорилось, что освидетельствованию подлежат: доноры (крови и других тканей); советские граждане, вернувшиеся из зарубежных командировок продолжительностью более 1 месяца; иностранцы, прибывшие СССР на срок более 3 месяцев из стран, где распространен СПИД: лица из "групп риска" (постоянные реципиенты донорской крови, наркоманы, гомосексуалисты и проститутки); лица, "имевшие контакты с больными или вирусоносителями". В конце перечня были названы лица, изъявившие желание пройти такое освидетельствование.

Эти документы подпели юридическую базу под уже фактически проводившийся в стране с 1986 г. скрининг донорской крови на ВИЧ и практику врачебных эпидрасследований, которая некоторое время играли у нас ведущую роль в выявлении распространения ВИЧ-инфекции. В обоих документах обращает на себя внимание норма, допускавшая применение принудительных мер к гражданам, уклоняющимся от обязательного тестирования, непосредственно органами здравоохранения или милиции безучастия представителей прокуратуры или суда. Вряд ли запугивание населения уголовной ответственностью за "заведомое поставление другого лица в опасность заражения" имело еше какой-то смысл кроме самоудовлетворения чиновников от медицины, стремившихся создать у представителей высших органов власти впечатление о том, что ими принимаются эффективные меры борьбы со СПИДом.

Более реальные меры такой борьбы были приняты самими врачами-эпидемиологами, клиницистами. Так, по их инициативе в феврале 1987 г. по Всесоюзному радио было сообщено об открытии в Москве кабинета анонимного обследования на СПИД. Через несколько дней этот кабинет заработал, принимая до тысячи человек в месяц.

Начатый в 1986 г. в нашей стране обязательный скрининг на ВИЧ больших контингентов населения постоянно расширялся. Более того, вопреки принятым Минздравом СССР нормам, кое-где на основе решений, принимавшихся на местном уровне, вводилось обязательное тестирование на ВИЧ всех пациентов, поступающих в стационары (особенно хирургические). В итоге в период с 1987 по 1992 г. было проведено свыше 95 млн. тестов на ВИЧ. Какова же была эффективность столь масштабной практики? При плановых обследованиях около 29 млн. доноров зараженных выявлено не было; из более чем 27 млн. протестированных беременных женщин было выявлено 30 зараженных; из 2 млн. больных венерическими заболеваниями - 58 зараженных; из почти 2 млн. заключенных - 3 зараженных и т.д. Анонимное обследование охватило лишь 356942 человека и позволило выявить 13 ВИЧ-инфицированных.

Если вспомнить, что один тест обходится бюджету здравоохранения в один доллар, то возникают серьезные сомнения в целесообразности затрат таких значительных средств на проведение столь малоэффективных мероприятий. Хорошо известно, что в большинстве других стран стратегия борьбы со СПИДом иная: соответствующее просвещение населения, программы обучения отдельных социальных групп безопасным формам поведения, всемерное побуждение лип, имеющих причины беспокоиться по поводу своего здоровья, пройти добровольное тестирование на ВИЧ и т.п.

Сказанное вовсе не означает полного отрицания целесообразности обязательного тестирования на ВИЧ для определенных групп населения.

Отдельного обсуждения заслуживает широко применяющийся в нашей стране так называемый "метод эпидрасследова ния". Эпидрасследование - это выявление источника заражения и каждом случае инфекции, по возможности, восстановление всей "цепочки" передачи инфекции и одновременно предпринимаемые меры по профилактике распространения инфекции.

В нашей стране с помощью метода эпидрасследования в период с 1987 по 1989 г. было выявлено до 70% всех ВИЧ-инфицированных. Именно благодаря использованию этого метода была доказана внутрибольничная передача ВИЧ-инфекции на юге России.

В указанный период были обследованы все, кто мог иметь хоть какое-то отношение к распространению инфекции; накоплен большой уникальный научный материал - практически от всех инфицированных были получены сыворотки и лимфоциты, причем у многих пациентов пробы брались неоднократно, что важно для изучения изменчивости вируса.

В странах, где тестирование на ВИЧ проводится в основном на добровольной основе, подобное было бы просто невозможно. Можно констатировать, что в данном случае отечественные медики успешно решили острейшую проблему общественного здравоохранения - очаг инфекции был локализован погашен за 10 месяцев - и выполнили весьма важную программу научных исследований.

В начале 90-х годов многие специалисты-медики и представители общественных движений (уже тогда в нашей стране стали формироваться общественные организации, оказывающие ВИЧ-инфицированным психологическую и социальную поддержку) осознали ограниченность стратегии, в основе которой лежит обязательное обследование (в основном - тестирование) огромных масс населения. Принципу добровольности тестирования стали уделять все большее внимание, и не только потому, что "так принято в цивилизованных странах", но и в силу привлекательности самого принципа как для пациентов, так и для врачей.

В результате в принятом в 1995 г. Федеральном законе "О предупреждении распространения и российской Федерации заболевания, вызываемого вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ-инфекции)" требование обязательного тестирования на СПИД "партнеров” 1 , то есть лип, и отношении которых у медиков могли возникать подозрения па инфицированность, было отменено. Отменено также и обязательное профилактическое наблюдение ВИЧ-инфицированных в учреждениях здравоохранения. Согласно этому Закону, медицинское освидетельствование на предмет ВИЧ-инфицированности проводится добровольно, а по желанию обследуемого - и анонимно. Обязательному тестированию на СПИД подлежат только доноры крови, биологических жидкостей, органов и тканей, а также представители отдельных профессий (прежде всего - медики).

и

Антитела к ВИЧ 1/2 – составляющие плазмы крови, белковой природы, которые препятствуют размножению ВИЧ-инфекции и полностью нейтрализуют их негативное влияние.

Что такое анализ на антитела к ВИЧ 1/2 (скрининг)

Скрининговый анализ на антитела к ВИЧ 1,2 – система тестов, которые позволяют выявить лиц, инфицированных вирусом иммунодефицита. Помимо этих, существуют и так называемые подтверждающие (вспомогательные)тесты, задача которых заключается в том, чтобы выявить лиц не инфицированных вирусом, но с положительной реакцией на вирус при скрининге.

Суть скринингового исследования ВИЧ-инфекции заключается в определении антител к вирусу иммунодефицита. Его отличительная особенность в повышенной чувствительности – более, чем 99,5%. Специфика тестирования состоит в том, что скрининг может дать ложноположительный результат, если в организме пациента содержатся аутоантитела.

Идентичный результат может быть выявлен и в случае болезни печени у пациента, противогриппозной вакцинации или же наличия какого-либо острого вирусного заболевания. Исходя из этого, для получения точных результатов, наряду со скринингом, обычно принято делать и упомянутый выше, подтверждающий тест.

Показания для анализа

В медицинской практике существует достаточно обширный спектр показаний для прохождения скринингового обследования. Пациент может обратиться в в случае:

возникновения подозрения на инфицирование (если имелся близкий контакт с носителем ВИЧ-инфекции);
при потерях веса, лихорадке;
пневмонии, которая не поддается обычной терапии;
заболеваниях хронического характера, возникших по непонятным причинам;
в процессе подготовки к хирургической операции;
переливания крови;
планировании беременности и семьи;
При воспаленных лимфоузлах;
Случайных половых связях.

Лица, попадающие в особую группу риска: наркоманы и люди, ведущие беспорядочную половую жизнь.

Как проводится скрининг на на антитела к ВИЧ 1/2

Проведение процедуры подразумевает соблюдение ряда необходимых правил:

пациент должен сдавать кровь исключительно натощак (пить воду разрешено);
с момента последнего приема пищи должно пройти не менее восьми часов;
врач должен быть уведомлен о том, какие лекарства принимает пациент и знать дозировку (если нет возможности даже кратковременной их отмены);
если пациент в состоянии повременить с применением лекарственных средств, ему рекомендовано это сделать за 10-15 дней до дня манипуляции;
за день до начала тестирования пациенту желательно отказаться от приема жареных или жирных продуктов, также ему запрещено употреблять алкогольные напитки, курить, ограничить тяжелые физические нагрузки.

Необходимо отметить, что лабораторные исследования на наличие инфекции у детей, которые были рождены от матерей-носителей вируса иммунодефицита, имеют свою специфику.